藻種管理的相關(guān)流程

光語(yǔ)藻種

1.1藻種的采集

 

實(shí)驗(yàn)室用藻種一是到國(guó)家法定機(jī)構(gòu)采購(gòu),二是購(gòu)買商業(yè)派生藻種,三是科研中藻種交流。不管是哪種來(lái)源,均統(tǒng)一采集。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證藻種合格和環(huán)境安全。采集中要有藻種傳代標(biāo)識(shí)。選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)藻株的合格供應(yīng)商,每批標(biāo)準(zhǔn)藻株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測(cè)報(bào)告或說(shuō)明書,來(lái)證明所采購(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)藻株是合格的。

 

1.2標(biāo)準(zhǔn)藻株和驗(yàn)收

 

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)準(zhǔn)藻株,首先應(yīng)進(jìn)行符合性感官檢查,記錄藻株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)藻株來(lái)源途徑信息,確保溯源性清楚。同時(shí)還應(yīng)記錄標(biāo)準(zhǔn)藻株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無(wú)破損等情況。

 

1.3凍干標(biāo)準(zhǔn)藻株的復(fù)活

 

1.3.1開啟產(chǎn)品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。

 

1.3.2復(fù)活:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件(根據(jù)藻種使用說(shuō)明書,見附錄)進(jìn)行復(fù)活。藻種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養(yǎng)基。凍干藻株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代,從標(biāo)準(zhǔn)藻株保藏中心購(gòu)買的凍干標(biāo)準(zhǔn)藻株為第F0代。

 

注:培養(yǎng)基后面的數(shù)字編號(hào)為產(chǎn)品編號(hào),如需采購(gòu),請(qǐng)聯(lián)系經(jīng)銷商或業(yè)務(wù)員。上表提供了藻種傳代短期保存的方法,供參考。

 

1.4工作藻株確認(rèn)方法及依據(jù)

 

用無(wú)藻接種環(huán)取上述培養(yǎng)物,在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板(營(yíng)養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂)上或相應(yīng)的細(xì)藻鑒別平板(如伊紅美藍(lán)、麥康凱、BP等上劃線分離單個(gè)藻落,置適宜條件下培養(yǎng)(若該類微生物為厭氧藻,則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件)。以同樣方法取真藻和酵母藻至SDA(薩布羅培養(yǎng)基)平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上,23~28℃下培養(yǎng)7d;培養(yǎng)后觀察是否具有典型的藻落狀態(tài),然后挑取單一純?cè)迓?,進(jìn)行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特征及藻體形態(tài)以確定藻種。

 

1.5 污染處理

 

假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他藻落生長(zhǎng),則說(shuō)明操作有污染或藻種不純。要將

 

該污染培養(yǎng)物做滅藻處理,尋找原因,重新分離挑選純?cè)迓洹?/span>

 

1.6藻種保存

 

所有藻種均由實(shí)驗(yàn)室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立藻種登記臺(tái)帳,詳細(xì)記錄藻種采集、保管、制備、使用、處置情況;每一種藻種一定要有檢測(cè)鑒定報(bào)告(具體的的鑒定方法見藻種質(zhì)量報(bào)告鑒定證書上的方法);

 

具體藻種固體保存方法一般為:

 

將培養(yǎng)基與滅菌甘油按15%甘油比例(肉湯8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃凍存,(可用2mL凍存管凍存多管),作為保藏儲(chǔ)備藻株F1代,也可使用商品化的藻種保存管。

 

1.7藻種的傳代

 

1.7.1標(biāo)準(zhǔn)藻株的復(fù)蘇:

 

① 藻種操作應(yīng)在無(wú)藻條件下進(jìn)行,防止雜藻污染。

 

② 每次使用和復(fù)蘇時(shí)只需將小珠在平板上滾動(dòng)或置肉湯中培養(yǎng)。

 

1.7.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備藻株每轉(zhuǎn)接一次須進(jìn)行確認(rèn)。(確認(rèn)方法一般為他們各自獨(dú)有的形態(tài),在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài))

 

1.7.3工作藻株轉(zhuǎn)接的方法:

 

①、配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,121℃高壓滅藻15分鐘后分裝在試管內(nèi),冷卻后備用。

 

②、在無(wú)菌條件下,用接種環(huán)挑取藻苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。

 

1.7.4工作藻株的使用

 

1.7.4.1內(nèi)部質(zhì)量控制:一個(gè)月一次陽(yáng)性對(duì)照、培養(yǎng)基每批驗(yàn)收;

 

1.7.4.2外部質(zhì)量控制:能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室比對(duì);

 

1.7.5工作藻株的期間核查

 

1.7.5.1期間核查的頻率:每半年對(duì)使用標(biāo)準(zhǔn)藻株進(jìn)行一次期間核查。

 

1.7.5.2工作藻株期間核查的方法及依據(jù):同工作藻株的確認(rèn)一樣。

 

1.7.5.3建立標(biāo)準(zhǔn)藻株期間核查記錄。

 

1.8藻種的標(biāo)識(shí)和使用期限:

 

1.8.1標(biāo)識(shí):藻種代數(shù)的計(jì)算為干粉藻種為第0代,轉(zhuǎn)接一次加一代。具體標(biāo)識(shí)為:例小球藻第0代,標(biāo)識(shí)為CL-0,第一代標(biāo)識(shí)為CL-01第一代有12支,則CL-01-01、……、CL-01-12;并標(biāo)明日期:如2016.02.13這樣填寫。

 

1.9 藻種的保藏

 

1.9.1將試管內(nèi)藻種放入冰箱中2~8℃冷藏保存。

 

1.9.2將傳代并經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后的藻種放入冰箱中2~8℃保存。每支保存藻種需標(biāo)明藻名、標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)、傳次、傳代日期。

 

1.10藻種的銷毀

 

1.10.1藻種使用后或超過(guò)貯存期的應(yīng)進(jìn)行銷毀。

 

1.10.2需銷毀的藻種,應(yīng)用高壓蒸汽(121℃)滅藻30分鐘。

 

1.10.3滅藻后,再進(jìn)行清洗和處理。

 

1.10.4銷毀的藻種應(yīng)做好記錄。銷毀時(shí)由化驗(yàn)負(fù)責(zé)人監(jiān)督銷毀,保管人員負(fù)責(zé)銷毀。

 

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