????劉伯華等利用分離的SAＲS－CoV毒株BJ－01，經(jīng)滴鼻等途徑感染大鼠、豚鼠、黑線倉鼠、白化倉鼠和雛雞等5個種屬的動物，篩選對SAＲS易感的小動物來建立SAＲS的理想動物模型。鄧巍等用BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后，研究肺組織動態(tài)病理學(xué)變化。
????動物生物安全實驗室是指對用病原微生物進行生物感染實驗研究時所產(chǎn)生的生物危害具有物理防護能力的生物安全實驗室。
????根據(jù)生物安全實驗室防護水平分為四級，以ABSL－1、ABSL－2、ABSL－3、ABSL－4表示涉及從事感染動物活動的實驗室的相應(yīng)生物安全防護水平。其中ABSL－3、ABSL－4實驗室適用于具有氣溶膠傳播潛在危害和引起致命性疾病的微生物感染動物實驗研究工作。由于其操作的微生物能夠引起人類或者動物非常嚴重的疾病，較容易直接或者間接在人與人、人與動物、動物與動物間傳播，因而生物安全防護水平最高。
????高級別動物生物安全實驗室建設(shè)過程中，氣密性保證實驗室空氣潔凈度、室內(nèi)實驗人員和室外環(huán)境安全的重要手段。本文結(jié)合國家標準的相關(guān)要求，對實驗室建設(shè)過程中氣密性的實現(xiàn)以及檢測進行探討，以期為我國高級別動物生物安全實驗室的建設(shè)提供參考。
1 氣密性要求
????實驗室氣密性要求是對實驗室防護區(qū)的氣密性要求。實驗室的防護區(qū)是實驗室區(qū)域內(nèi)，生物風(fēng)險相對較大，需對實驗室的平面設(shè)計、圍護結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流以及人員進入、個體防護等進行控制的區(qū)域（表1）。不同級別實驗室對防護區(qū)的劃分不同。
????為保證實驗室的環(huán)境安全，應(yīng)保證生物安全實驗室防護區(qū)始終處于相對密封的環(huán)境，防止微生物的外逸，易于實驗室的清潔消毒，同時避免外部對實驗室環(huán)境的破壞?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ靡蟆罚℅B19489－2008）及《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》（GB50346－2011）對不同級別的（A）BSL－3/4主實驗室的氣密性指標有明確規(guī)定，見表2。應(yīng)當注意的是，不同于BSL－3實驗室淋浴間屬于輔助工作區(qū)，《實驗室生物安全通用要求》（GB19489－2008）明確規(guī)定，適用于4．4．1的實驗室淋浴室亦屬于防護區(qū)。
2 氣密性保證
2．1實驗室裝修
????在（A）BSL－3/4實驗室眾多的安全措施中，一級屏障和二級屏障尤為重要。一級屏障是操作者和被操作對象之間的隔離，二級屏障是生物安全實驗室和外部環(huán)境的隔離。
????實驗室在建設(shè)過程中應(yīng)將二級屏障做為實驗室建設(shè)最重要的內(nèi)容。尤其是對于ABSL3（c）及以上級別實驗室核心實驗室具有氣密性打壓要求（表2），這就要求主實驗室不僅在建造時選用可靠的裝修材料、遵循合理的施工方案、有效可行的實驗室圍護結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝方案，還要求在實驗室竣工投入使用以后圍護結(jié)構(gòu)性能進行定期維護和檢修。
????實驗室裝修應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，墻地面材料應(yīng)耐磨、抗腐蝕、易清潔?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ靡蟆罚℅B19489－2008）明確要求：ABSL－3及以上級別實驗室工作區(qū)的圍護結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)光滑、耐腐蝕、防水，天花板、地板、墻間的交角應(yīng)為圓弧形，以易于清潔和消毒。地面應(yīng)防滲漏、完整、防滑，地面防護層應(yīng)連續(xù)到立面15cm處。實驗室工作區(qū)圍護結(jié)構(gòu)的所有縫隙，尤其是貫穿的縫隙都應(yīng)可靠密封。
????《實驗室生物安全通用要求》（GB19489－2008）對實驗室潔凈度有明確規(guī)定，見表2。當實驗室墻體面板采用彩鋼板時需要注意，對于潔凈度要求高的房間若采用巖棉彩鋼板，該板在施工過程中及實驗室投入使用時會產(chǎn)生巖棉碎屑，難以達到潔凈要求。另外對于ABSL－3及以上級別核心實驗室，要求空氣壓力維持在－250Pa時，房間內(nèi)每小時泄露的空氣量應(yīng)不超過受測房間凈容積的10%［6］。混凝土或不銹鋼壁板在采用一定的技術(shù)手段情況下均能滿足打壓氣密要求，不銹鋼壁板在施工安裝過程中應(yīng)特別注意不同壁板之間的氣密連接。彩鋼板壁板性能及其安裝工藝目前尚不能滿足該級別實驗室氣密性打壓要求。
2．2圍護結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝
????用于實現(xiàn)二級屏障功能的實驗室維護結(jié)構(gòu)設(shè)備包括生物安全氣密門、生物安全傳遞窗、高壓滅菌器、化學(xué)淋浴系統(tǒng)、雙原位高效過濾送排風(fēng)口等設(shè)備。這些設(shè)備的安裝氣密性是組成實驗室氣密性的重要步驟，也是實驗室驗收檢測的重要內(nèi)容。目前國內(nèi)外高級別生物安全實驗室均采用304以上不銹鋼質(zhì)的氣密門，氣密方式分為機械壓緊式和自動充氣膨脹式，均能滿足需求。生物安全傳遞窗具有雙門互鎖，用于傳遞物品的普通型傳遞窗和用于傳遞工具的渡槽型傳遞窗?；瘜W(xué)淋浴是ABSL－3和ABSL－4實驗室人員防護的重要設(shè)施。雙原位高效過濾送排風(fēng)口是實驗室送排風(fēng)系統(tǒng)保證新風(fēng)供給和污染因子去除的重要保障。
????維護結(jié)構(gòu)設(shè)備安裝應(yīng)保證氣密性，氣密性標準應(yīng)不低于所在區(qū)域的防護水平。三級和四級生物安全實驗室相鄰區(qū)域和相鄰房間之間應(yīng)根據(jù)需要設(shè)置傳遞窗，傳遞窗兩門應(yīng)互鎖，并應(yīng)設(shè)有消毒滅菌裝置，其結(jié)構(gòu)承壓及嚴密性應(yīng)符合所在區(qū)域的要求。我國已有專業(yè)公司掌握了該類設(shè)備安裝工藝，采用不銹鋼框架預(yù)埋或直接留洞安裝。其中預(yù)埋件安裝方式，氣密門、高壓滅菌器等尺寸較大的設(shè)備對土建留洞尺寸的精度要求較高，預(yù)埋完成后上下、左右誤差不能超過±5mm。設(shè)備相關(guān)水、電、氣管道在穿越維護結(jié)構(gòu)時應(yīng)使用專業(yè)管道穿墻密封器，以確保實驗室墻體的完整性、防火性和氣密性。
3 氣密性檢測
????實驗室建設(shè)完成以及涉及圍護結(jié)構(gòu)的設(shè)備安裝應(yīng)在安裝后使用專業(yè)的檢測方式進行安裝密閉性檢測。目前通用的密閉性檢測方法包括壓力衰減法、皂液法和超聲波檢測法。對于規(guī)范中要求需打壓測試的核心實驗室在進行氣密性檢測時應(yīng)使用壓力衰減法，涉及圍護結(jié)構(gòu)的設(shè)備安裝可使用通用的三種檢測方法。
其中壓力衰減法即在施加一定正負壓力下，測試在一定時間之后的壓力變化?？捎脕頇z測倉體和設(shè)備安裝的氣密性。在進行實驗室整體氣密性檢測時，封閉所有氣體進出口；設(shè)備安裝氣密性檢測時，將設(shè)備安裝到密封艙體或密封房間內(nèi)，進行加壓測試。記錄下檢測前的絕對壓力和檢測后的絕對壓力，以及檢測系統(tǒng)的體積和滲漏體積。每五分鐘進行一次記錄。
????皂液法檢測法是在安裝界面涂抹一種可產(chǎn)生氣泡的溶液（一種工業(yè)試劑或洗滌劑、甘油和水三等份的混合溶液）。過一會但在溶液干之前，檢查涂濕的部位，在有氣泡的地方做出標記。除非另有規(guī)定，泄露跡象是：一些1/16英寸（1．5mm）直徑的氣泡在1秒內(nèi)形成或1個9/32英寸（7．14mm）直徑的氣泡在一分鐘內(nèi)形成。
????超聲波控制器檢測法是采用超聲波控制器進行密封性檢測。超聲檢漏方法可非常便捷有效的通過觀察檢漏儀的檢測信號強弱，檢測泄漏的位置及泄漏量大?。▓D2）。
4 展望
????我國近年來許多地方和單位的實驗室生物安全硬件得到較大改善，隨著實驗室生物安全各項法律法規(guī)的貫徹執(zhí)行，對實驗室硬件的要求也相應(yīng)提高。目前我國采用的實驗室維護結(jié)構(gòu)設(shè)備包括生物安全氣密門、生物安全傳遞窗、化學(xué)淋浴系統(tǒng)等設(shè)備多數(shù)為國外進口產(chǎn)品。進口設(shè)備多為國外生產(chǎn)組裝在出廠前進行性能包括設(shè)備氣密性能測試。但值得注意的是，我國有些在建實驗室中化學(xué)淋浴間土建工程已經(jīng)完成，化學(xué)淋浴系統(tǒng)設(shè)備不得不拆分后再在淋浴間內(nèi)安裝重組。
????這種情況下應(yīng)特別注意安裝完成后對設(shè)備性能進行逐項檢測，并由供應(yīng)商專業(yè)工程師全程負責。
????另外，圍護結(jié)構(gòu)設(shè)備重要的性能之一即是設(shè)備本身的氣密性，設(shè)備在頻繁使用過程中會造成零部件損耗及連接松弛等問題。因此，加強對該類設(shè)備本身性能以及安裝界面的定期維護也是實驗室氣密性保證的重要內(nèi)容。
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取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研缽內(nèi)，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干凈的棕色玻璃瓶。并用完甲醇為止。配制好的染液在室溫中保存，即可使用。新鮮配制的染液偏堿性，放置后呈酸性，染液貯存愈久染色愈好。這染液的適宜pH值是6.4～6.8。因此，染色時加入緩沖液，可維持一定的酸堿度，使染色效果更好。
這種染液除能染血液，還能染瘧原蟲。
瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氫鈉水溶液里加入1克美藍，溶解后放在鍋內(nèi)，蒸上1小時，取出冷卻后過濾。在濾液里加入0.1%伊紅水溶液500毫升，隨加、隨攪拌，使混合液呈紫色。靜置一夜后，用濾紙過濾。濾紙上的沉淀物，在室內(nèi)風(fēng)干或放在干燥箱內(nèi)，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。
配方二?甲基紫染液
取甲基紫0.5克，加到100毫升生理鹽水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。
取固綠0.1克，溶于100毫升95%酒精中，即成0.1%固綠-酒精溶液。
該液能染色纖維素細胞壁，還用于動植物中作漿質(zhì)染色劑。
配方二?纖維素細胞壁染液（Ⅱ）
氯化鋅?20克?碘化鉀?6.5克
碘?1.5克?蒸餾水加至100毫升
先把氯化鋅溶于少量蒸餾水中，再加入6.5克碘化鉀，在碘完全溶解后，用蒸餾水稀釋到100毫升，即成碘-氯化鋅溶液。
該染液能把細胞壁染成紫色，胞質(zhì)染成淡黃色，胞核染成棕色。
配方三?纖維素細胞壁染液（Ⅲ）
甲液?取1克碘和1.5克碘化鉀，溶于100毫升蒸餾水中，即成1%碘液。
乙液?取7份硫酸和3份蒸餾水相混，即成66.5%硫酸溶液。
染色時，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纖維素細胞壁就染成黃色。
配方四?木質(zhì)化細胞壁染液（Ⅰ）
硫酸化苯胺（或鹽酸話本安）?1份
蒸餾水?70份?95%酒精?30份
硫酸?30份
將上述各組分相混，將細胞材料放入混合液里染色，可是木質(zhì)化細胞壁呈鮮黃或姜黃色。
配方五?木質(zhì)化細胞壁染液（Ⅱ）
取間苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成間苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴濃鹽酸，然后滴上間苯三酚-酒精液1滴，木質(zhì)化的細胞壁就染上櫻紅或紫紅色。
配方六?木質(zhì)化細胞壁染液（Ⅲ）
取1克番紅，溶于99毫升蒸餾水中，即成1%番紅溶液。
配方 霍格倫德（Hoagland）和斯納德（Snyder）液
硝酸鈣 0.821克 硝酸鉀 0.506克
磷酸二氫鉀 0.136克 硫酸鎂 0.120克
酒石酸鐵 0.005克
把上述鹽類溶解在少量蒸餾水里，然后稀釋到1000毫升。The post 植物無土培養(yǎng)液配置方法 first appeared on 上海光語生物科技有限公司.]]>
哺乳類?需用生理鹽水濃度是0.9%。稱取0.9克氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到100毫升。
鳥類?需用的生理鹽水濃度是0.75%。稱取0.75克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。
兩棲類?需用的生理鹽水濃度是0.65%。稱取0.65克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。
配方二?任氏（Ringer’s）生理鹽水
氯化鈉?6.5克?碳酸氫鈉?0.2克
氯化鉀?0.14克?磷酸二氫鈉?0.01克
氯化鈣?0.12克
先把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉分別溶解在少量蒸餾水中，混合后用蒸餾水稀釋到980毫升。然后取氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水中，把氯化鈣溶液逐滴加入到上述溶液內(nèi)，邊滴、邊攪拌，以免產(chǎn)生不溶解的磷酸鈣沉淀。
此溶液用于變溫動物，尤其常用于兩棲類。
配方三?樂氏（Locke’s）生理鹽水
氯化鈉?9.0克?碳酸氫鈉?0.1～0.3克
氯化鉀?0.42克?氯化鈣?0.24克
把氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉分別用少量蒸餾水溶解，混合后加蒸餾水到980毫升。把氯化鈣溶解在20毫升蒸餾水里，逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用于恒溫動物，尤其常用于哺乳類。
配制的方法是先分別配制1%中性紅溶液和1%甲基藍溶液，這兩種溶液各取1份混合，用來鑒定細胞的死活。該試劑使活細胞的液泡染上紅色，而使死細胞全部染成藍色。
The post 檢查細胞生活力的試劑配置方法 first appeared on 上海光語生物科技有限公司.]]>檢查二氧化碳的試劑，可用溴代麝香草酚藍溶液和石灰水。
配方一?溴代麝香草酚藍溶液
取0.1克溴代麝香草酚藍，溶解在100毫升蒸餾水里，滴入少量0.1%氫氧化鉀溶液，使它成為弱堿性溶液而呈藍色。
溴代麝香草酚藍溶液pH值變色范圍是6.0（黃）～7.6（藍）。待測物中如果有二氧化碳，會形成碳酸而使溶液變成黃色。
配方二?石灰水
在蒸餾水中加入生石灰（氧化鈣），變加邊攪拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈飽和狀態(tài)時為止。在石灰水澄清后，傾出上層清液，用濾紙過濾，放在密閉瓶內(nèi)保存。
如果測定的物質(zhì)中有二氧化碳，會生成碳酸鈣，使石灰水變渾濁。
蘇丹Ⅲ（Ⅳ）酒精飽和溶液
取0.2克蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ），放入純酒精中，加熱，使它充分溶解，成為飽和酒精溶液，過濾后密閉在試劑瓶內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>The post 檢查脂肪的試劑配置方法 first appeared on 上海光語生物科技有限公司.]]>
配方一?米倫（Millon）試劑
在60毫升濃硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加溫可助溶），溶解后加入兩倍體積的蒸餾水稀釋，靜置澄清后，取它上層的清液備用。這種試劑可長期保存。
在待測物中加入少量米倫試劑，加熱，如果有蛋白質(zhì)，會出現(xiàn)紅色。這種試劑不能用來測定尿中的蛋白質(zhì)。
配方二?雙縮尿試劑
分別配制10%氫氧化鈉溶液和1%硫酸銅溶液。
在3毫升待測物中加入1毫升10%氫氧化鈉溶液和1滴1%硫酸銅溶液。如果有蛋白質(zhì)，會出現(xiàn)紫色反應(yīng)。
魯哥氏（Lugol’s）溶液（碘液）
取6克碘化鉀溶于20毫升蒸餾水中，攪拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸餾水，貯存在棕色試劑瓶內(nèi)。
碘液用來測試食物樣品或葉片中的淀粉，也用作染色劑，例如可染色鞭毛、纖毛和細胞核等。