1、酒精
70%的酒精殺菌力最強,它能使蛋白質脫水和變性,在3~5分鐘內殺死細菌。因此,它用于消毒和防腐,適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精(95~100%)能引起菌體表層蛋白質凝固,形成保護層,使酒精分子不易透入,因此殺菌能力反而弱。
2、碘酒
碘酒是碘和碘化鉀的酒精溶液,2%的碘酒在10分鐘內能殺死細菌和芽
孢,可用于皮膚的消毒。藥房出售的一般是2%的稀碘酒。實驗室內也可自配碘酒,配方為:
碘化鉀?25.克?碘?3.5克
95%酒精?95%酒精?蒸餾水?27毫升
先取碘化鉀溶在2毫升蒸餾水中,再加入碘,攪拌后加入酒精,到碘充分溶解后,補足蒸餾水,即成碘酒。
3、高錳酸鉀
高錳酸鉀是強氧化劑,有很強的殺菌作用。0.1%水溶液用作皮膚消毒,2~5%水溶液能在24小時內殺死細菌芽孢。這溶液在空氣中溶液分解,失去氧化能力,要現(xiàn)用現(xiàn)配。
4、苯酚(石炭酸)
石炭酸是有效的常用殺菌劑,1%水溶液能殺死大多數(shù)的菌體,通常用3~5%水溶液作接種室噴霧消毒或器皿的消毒,5%以上溶液對皮膚有刺激性。在生物制品中,加入0.5%石炭酸可作防腐劑。
5、來蘇爾
來蘇爾即煤酚皂溶液。它的殺菌效力比石炭酸大4倍,通常以1~2%溶液用于手的消毒(浸泡2分鐘)和無菌室內噴霧消毒,5%溶液多用于各種器械和器皿的消毒。
6、新潔爾滅
新潔爾滅是常用的消毒劑,主要用于皮膚、醫(yī)療器械、器皿、接種室空氣等的消毒滅菌,對許多非芽孢型病原菌、革蘭氏陽性菌和陰性菌經(jīng)幾分鐘接觸即滅菌,尤其對格蘭氏陽性菌殺菌力更大。本品原液的濃度是5%,通常用0.1~0.25%水溶液。用新潔爾滅消毒金屬器械時,要在1升溶液中加入5克亞硝酸鈉,以防生銹。
7、福爾馬林
福爾馬林是常用的殺細菌、真菌劑。它的2~5%水溶液能在24小時內殺死細菌芽孢,常用來消毒器皿和器具。如果用作無菌室等房屋消毒,取100毫升福爾馬林,放在盆內,用小火微熱,促使蒸發(fā),在10小時內可消菌3立方米左右體積房屋的空氣。
加拿大樹膠是半透明的固體樹脂,能溶于二甲苯、苯等溶劑。加拿大樹膠溶于二甲苯后,它的折光率是1.52,接近于玻璃的折光率(1.51),透明度很好,用以封片幾乎無色,干后堅硬牢固,可長期保存。因此,他是封片常用的封藏劑。市售的加拿大樹脂有濃液體和固體兩種。如果是固體,可以在樹膠中加入約相當于樹膠體積一半量的二甲苯,放在溫暖處,時常攪拌,促使樹膠溶化。溶化后的較液濃度以膠液能沿玻璃棒一端順利下流為宜(如果要封藏后使它干燥更快,可用苯代替二甲苯)。
加拿大樹膠在使用和貯存時應注意:1、不能加熱,否則樹膠立即變成深褐色,影響封片后的觀察;2、樹膠應貯存在棕色瓶內,避光保存;3、玻璃瓶口應密閉,以防蒸發(fā)凝固;4、為了防止樹膠變酸,在樹膠內加入幾小塊用二甲苯清洗過的大理石,以中和酸性。
用阿拉伯樹膠作為封藏劑的優(yōu)點是便于在這種封藏劑中整理標本形態(tài)。阿拉伯樹膠作為封藏劑有多種配方,下述配方適于小型昆蟲的整體狀片。
配方
阿拉伯樹膠?8克?水合氯醛?20~40克
甘油?5毫升?冰醋酸?3毫升(可略)
蒸餾水?10毫升
配置方法?先把純凈的阿拉伯樹膠放在蒸餾水里,加熱,待膠溶化后,加入水合氯醛,邊加邊攪拌,使它充分溶解后加入甘油和冰醋酸,攪拌均勻后,貯存在瓶里,密閉保存。貯存時要避免灰塵或濕氣浸入。
這種封藏劑用于整體裝片,尤其適用于封藏藻類、菌類、苔蘚的原葉體或其他較小材料。
配方
石炭酸?1份?乳酸?1份
甘油?1~2份?蒸餾水?1份
它是目前應用最廣的一種透明劑,價格比較便宜,折光率1.497,易揮發(fā),無色透明液體,易溶于酒精又能溶解石蠟,能跟封藏劑樹膠混合,不能和水混合,透明作用強,且迅速。它的缺點是容易使組織收縮變硬、變脆,所以組織不能在其中停留過久,同時材料必須完全脫水后才能應用,否則做成的標本易出現(xiàn)空洞,經(jīng)封藏后會產生白色云霧狀,影響觀察和保存。
用二甲苯透明時,一般先用純酒精和二甲苯等量混合浸1~2小時,置換材料中的酒精,再放在純二甲笨中透明,總透明時間不宜超過3小時,染色后的制片一般在二甲苯中經(jīng)過5~10分鐘透明即可。
它的性質和二甲苯相同,價格比較便宜,可作二甲苯的代用品。它的優(yōu)點是組織在二甲苯中留置12~24小時也不變脆,缺點是透明較慢。
它的性質近似二甲苯,易爆炸,人吸入苯能引起中毒,所以用時必須小心。
組織在其中浸存較久,收縮不太厲害,也不會變脆,容易揮發(fā)。它的缺點是滲透力稍弱,透明時間比二甲苯、苯還慢,所以應比二甲苯延長約2~3倍時間。他適于透明大塊組織。
用香柏油作透明劑效果很好。它的折光率是1.515,有高度透明作用,使組織收縮和硬化的程度比任何透明劑(二甲苯、苯、氯仿等)都小,價格較便宜。它的缺點是透明慢,小塊組織一般需12小時以上,不易被石蠟所替代,不能跟樹膠相混合。為浸臘方便起見,經(jīng)香柏油透明的組織,尚需再用二甲苯或苯洗幾次,除去香柏油,以便加速石蠟的浸透。香柏油極毒,用時必須小心。
嘴純凈的香柏油,可作油鏡上用的浸油。
1、酒精?
市場出售的酒精有95%和100%(純酒精)兩種。高濃度的酒精(95%以上)對組織有強烈的收縮和脆化的缺點,因此材料在水洗后不能立即投入高濃度酒精中。脫水時為了避免材料萎縮、僵硬,應在不同濃度的酒精里逐漸脫水。一般組織(除神經(jīng)組織、柔軟組織外)可從70%酒精開始經(jīng)80%、95%、100%酒精,使它逐步脫水。對一些柔軟組織如胚胎組織、低等無脊椎動物組織,要從70%酒精以下的50%或30%或20%開始,否則組織收縮較大。以上各種濃度的就經(jīng)常用95%酒精加蒸餾水稀釋而成,而不用純酒精稀釋,因為它的價格太貴。
2、制取無水酒精?
在酒精脫水劑中,無水酒精是最高一級的濃度脫水劑,中學生物實驗室一般用一下方法由95~96%的酒精來制取無水酒精。取藍色的結晶硫酸銅粉末,放入烘箱內烘烤,直到藍色粉末脫水呈青白色時止。在酒精里放入青白色的硫酸銅粉末(它遇水就轉藍色),直到加入的硫酸銅不變藍色,表明酒精以呈無水狀態(tài),就裝瓶密封。
3、回收酒精?
脫水用的酒精,使用以后,要按各種濃度分別收集起來。待收到一定量后,就可過濾,并用酒精比重計測定濃度,然后,再用來配置各級低度酒精。如果用過的酒精濃度較低,要蒸餾后再用。
The post 常見脫水劑配置方法 first appeared on 上海光語生物科技有限公司.]]>常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福爾馬林、酒精、甘油以及由這些藥物按比例配制成的各種混合液。有時按特殊保存的需要,再保存液中增加某些藥品(如原生標本的保存液)。
福爾馬林在固定組織標本時殺菌能力強,所以防腐性強,滲透力大,固定得快。永福爾馬林固定精細的解剖標本時,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的濃度是5~10%(根據(jù)材料的大小、性質和數(shù)量而定)。
保存液常用的濃度是5~10%。用福爾馬林作保存液,效果好且價格低廉。
在配制福爾馬林溶液(固定液或保存液)時,應將37~40%的甲醛作為整個溶質來配。例如配制5%福爾馬林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸餾水混合。實際上甲醛含量只有1.9~2%,這樣的配法已成為一般實驗室常用的慣例。
注意事項:
(1)福爾馬林業(yè)在長期貯存中會產生蟻酸,可適量的加入碳酸鈣(?)或碳酸鎂(?)等堿性物質進行中和。
(2)福爾馬林業(yè)作為保存液會慢慢揮發(fā)而致使?jié)舛冉档停⑶腋栺R林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液變濁,影響觀察。所以,根據(jù)一定保存期的情況,可適當增加福爾馬林液的濃度或更換新液,以防標本變壞。其中如有白色沉淀物,加熱后可使它溶解。
(3)市售的福爾馬林液常帶有酸性,能腐蝕石灰質,因此,最好不用福爾馬林液浸制有石灰質外殼的動物。
酒精也是常用的固定液,它有強烈的殺菌作用,對組織材料的滲透力較大,固定的快。但是,它的脫水作用較強,在高濃度的酒精中容易使材料顯著硬化和收縮。一般用于固定浸制標本材料,分一級或二級固定,即70%或50%與70%的酒精。有些小型材料或精細的解剖材料,最好用二級或三級固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再進行保存。從經(jīng)濟效果來考慮,一般酒精應跟福爾馬林液等固定液混合使用。
市售的工業(yè)用酒精濃度是95%左右,因此用時要重新配制。保存液的濃度通常是70%。
注意事項:
(1)在固定材料時要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必須先往體內注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料內部腐懷變質。用福爾馬林液固定也是如此。
(2)高濃度的酒精有脫水、脫脂作用。含有多量脂肪或擬脂標本(如腦、脊髓)等都不宜用較高濃度的酒精作保存液。
(3)為了防止酒精使標本硬化,保存一些精細的材料或解剖標本時,因加入少量甘油,因為甘油具有潤軟組織的作用。
(4)忌跟鉻酸、鋨酸和中鉻酸鉀等氧化劑配合。
醋酸即乙酸,純醋酸在低于16.7攝氏度時會凝成冰狀固體,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透組織,因為它不能沉淀細胞質中的蛋白質,組織不會硬化。一般常跟酒精、福爾馬林、鉻酸等容易引起組織變硬和收縮的液體混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用濃度是0.3%~5%。
苦味酸是一種黃色結晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)??辔端嵋材艹恋硪磺械鞍踪|,穿透較慢,固定后,組織收縮明顯,但不使組織硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸餾水中加入苦味酸約1.5克,制成飽和水溶液。固體苦味酸易爆,長制成飽和水溶液保存。
升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以針狀結晶為最純。通常固定時用飽和水溶液,有時也用70%酒精作溶劑,不單獨用作固定劑。升汞的穿透力較弱,通常用于小型材料,對蛋白質有強烈的沉淀作用,硬化程度中等。
固定液用飽和溶液,濃度約為7%。
配方
95%酒精?170毫升?蒸餾水?280毫升
福爾馬林?60毫升?冰醋酸?20毫升
冰醋酸要在臨用前加入。
這時極好的昆蟲保存液,常用來殺死和保存小型、身體柔軟的種類入螨、蜈蚣、馬陸等。在這溶液里加入少量甘油,能防止蟲體變脆。
配方
純酒精?6份?冰醋酸?1份
氯仿?3份
這種固定液能固定細胞質和細胞核,尤其適宜于固定染色體,所以多用于細胞學的質片,還用來固定腺體、淋巴組織以及原生動物的胞殼等。這種固定液穿透得快,因此一般小塊組織固定20~40分鐘,大型材料不超過3~4小時。固定后用95%或純酒精洗滌,換液兩次,移到石蠟中或用80%酒精保存。
配方
60%酒精?50毫升?冰醋酸?2毫升
80%硝酸?7.5毫升?升汞?10克
蒸餾水?440毫升
這是常用的固定液,適用于肉質菌類,特別是柔軟膠質狀的材料如木耳等,也廣泛用于無脊椎動物和一般組織和蛙胚的固定。固定時間18~20小時,然后用50%酒精沖洗材料,除去升汞。如果用水沖洗,會使材料膨脹?;旌弦罕4?4小時后失效。
配方
50%酒精?85毫升?福爾馬林?10毫升
冰醋酸?5毫升
這種固定液適用于固定一般植物莖、葉組織,昆蟲和甲殼類動物。液組織在這溶液里固定12小時,木質化組織要固定1周,材料也可在此液中長期保存。固定后的材料放在50%酒精中沖洗1~2次。
配方
在20%硫酸水溶液內加入苦味酸,直到飽和。
這種固定液適用于雞胚的固定,也用于許多小型海洋生物的固定。
配方
苦味酸飽和水溶液?75毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?25毫升
這是常用的良好固定劑,滲透迅速,固定均勻,組織收縮少,染色后能顯示一般的微細結構。一般動物組織、無脊椎動物的卵和幼蟲以及一般組織學、胚胎學的材料,如植物組織的根尖和胚囊都可用它來固定。一般組織固定24~48小時,小塊組織固定4~16小時,動物材料能在這種固定液中長期保存。固定后,動物材料用70%酒精沖洗凈苦味酸,到無黃色為止(用酒精沖洗時,加幾滴氨水,可加快除去黃色);植物材料用20%酒精沖洗幾次。
配方
甲液?升汞飽和水溶液?66毫升
95%酒精?33毫升
乙液?冰醋酸?1毫升
甲、乙液要在臨用前混合。
這種固定液適用于固定有鞭毛的原生動物、植物的精子和游動孢子等。材料如制作涂布裝片,可在40攝氏度下固定10~20分鐘。
配方
丙酮?40毫升?冰醋酸?1.5毫升
升汞?2克?甲醛?10毫升
蒸餾水?40毫升
這種固定液適用于眼球的固定,并可在固定液中長期保存。
配方
甲液?鉻酸?1.5克?冰醋酸?10毫升
蒸餾水?90毫升
乙液?福爾馬林?40毫升?蒸餾水?60毫升
臨用前將等量甲、乙液混合。
高等植物有絲分裂材料適宜在這種固定液里固定或長期保存。
配方一
硫酸銅?5克?水?95毫升
這種保存液適用于綠色植物和一切植物綠色部分的保存。植物放入硫酸銅液后,由綠變黃,再由黃變綠。這時取出材料,用清水漂洗干凈,浸在5%福爾馬林液內長期保存。
配方二
硫酸銅?0.2克?95%酒精?50毫升
福爾馬林?10毫升?冰醋酸?5毫升
水?35毫升
先把硫酸銅溶于水中,然后加入配方中的其他組分。綠色標本能長期的貯存在該液中。
配方三
醋酸銅?15~30克?50%醋酸?100毫升
在50%醋酸中逐漸加入醋酸銅,直到飽和。適用時取原液1份,加水4份,即成稀釋的硫酸銅溶液。
這種保存液適用于表面有蠟質、蛙質、質地較硬的綠色植物保色。加熱稀釋到醋酸銅溶液,放入植物,輕輕翻動,到植物由綠轉黃再轉綠色時取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福爾馬林液內保存。
配方一
甲液?硼酸?3克?福爾馬林?4毫升
水?400毫升
乙液?亞硫酸?2毫升?硼酸?10克
水?488毫升
把紅色的果實浸在甲液里1~3天,等果實由紅色轉深棕色時取出,移到乙液里保存,同時在果實內注入少量乙液。
配方二
氯化鋅?2份?福爾馬林?1份
甘油?1份?水?40份
先把氯化鋅溶解在水里,然后加入配方中其他組分。溶液如果渾濁而有沉淀,應過濾后使用。紅色果實能在此液中保存。
配方一
甲液?硫酸銅?5克?水?95毫升
乙液?6%亞硫酸?30毫升?甘油?30毫升
95%酒精?30毫升?水?900毫升
先把植物標本在甲液中浸1~2天,取出洗凈后,浸入乙液中保存,同時在果實內注入少量乙液。
配方二
6%亞硫酸?568毫升?80%酒精?568毫升
水?450毫升
植物材料能在這種保存液中長期保存。
配方一
95%酒精?20毫升?福爾馬林?20毫升
水?60毫升
使用時,取1份原液加9份水稀釋,植物材料能在這溶液中保存。
配方二
食鹽飽和水溶液?30毫升?水?175毫升
福爾馬林?20毫升?甘油?少量
植物材料能在這溶液中保存。
配方一
甲液?5%硫酸銅溶液
乙液?1~4%亞硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。雜有綠色的白色植物材料先浸在5%硫酸銅溶液內1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。
配方二
氯化鋅?32克?95%酒精?125毫升
水?1000毫升
把氯化鋅溶于水中,再加入酒精。植物材料能在這溶液中保存。
甲液?福爾馬林?4毫升?醋酸銅?1克
硝酸鉀?1克?水?100毫升
乙液?甘油?20毫升?醋酸鉀?10克
福爾馬林?1毫升?水?100毫升
先把昆蟲幼蟲放在80攝氏度熱水中燙死,曬干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀釋一倍的乙液中保存。
配方二
甲液?95%酒精?90毫升?甘油?2.5毫升
福爾馬林?2.5毫升?冰醋酸?2.5毫升
氯化銅?3克
乙液?冰醋酸?5毫升?福爾馬林?4毫升
水?100毫升
將絕食1~2天的幼蟲,用注射器從肛門向體內注射甲液,12小時后轉入乙液內保存,約20天更換1次乙液。
甲液?苦味酸飽和液?10毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?2.5毫升
乙液?與綠色幼蟲保存液配方二乙液相同
用注射器從幼蟲肛門內注入甲液,12小時后轉入乙液內保存。
硼砂?2克?50%酒精?100毫升
昆蟲幼蟲能在這溶液中保存。
甲液?福爾馬林?200毫升?硝酸鉀?15克
醋酸鉀?30克?水?1000毫升
乙液?甘油?200毫升?醋酸鉀?100克
麝香草酚?2.5克?水?1000毫升
先把材料放在甲液內固定,固定時間根據(jù)材料的大小而定,一般需1~5天。當材料失去自然色澤而呈暗褐色時,用手輕輕擠壓,直到?jīng)]有淡紅色血水流出時,取出材料,用清水沖洗,在浸在85%酒精中3~24小時(不能太久,否則易破壞色素),到血色恢復后,浸在乙液中保存。
配方一?茜素紅染液(Ⅰ)
取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在這種混合液中方入少量茜素紅,制成茜素紅飽和溶液。
配方二?茜素紅溶液(Ⅱ)
取1克茜素紅,溶于100毫升95%酒精中,攪拌,然后跟900毫升1%氫氧化鉀溶液相混,即成深紫色的茜素紅染液。
配方一?中性紅染液
先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升,用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升,即成0.02%中性紅水溶液,貯存在棕色瓶里,放在黑暗處。
本染液用來顯示原生動物的食物泡以及動植物組織中活細胞的內含物等。
配方二?尼羅藍(Nile?Blue)染液
取0.1克尼羅藍,溶解于1000~1500毫升蒸餾水中,即成尼羅藍染液。
這種染液能把原生動物大核染成綠色,食物泡染成藍色。
配方三?亞甲藍染液
取0.1克亞甲藍,溶解于1000毫升蒸餾水中,即成亞甲藍染液。
這種染液用于原生動物的活體染色。
蘇丹Ⅲ染液
取0.1克蘇丹Ⅲ,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%蘇丹Ⅲ染液。
這染液能染脂肪,還能染木栓、角質層。
配方一?詹鈉斯綠B(Janu’s?green?B)酒精飽和溶液
取125毫升詹鈉斯綠B,加入到62.5毫升無水酒精中,攪拌,即成煙魯綠B酒精飽和染液。
(1)取詹鈉斯綠酒精飽和染液按1:30000比例加蒸餾水稀釋,用來染原生動物線粒體。
(2)取詹鈉斯綠酒精飽和液,按1:10000比例加蒸餾水稀釋,用來染新鮮蛙血線粒體。
配方二?詹鈉斯綠B中性紅染液
先配制詹鈉斯綠B和中性紅酒精飽和液。詹鈉斯綠酒精飽和液見配方一。中性紅酒精飽和液配制方法:取125毫升中性紅,加入到50毫升無水酒精中,攪拌。
在10毫升生理鹽水(兩棲類生理鹽水濃度為0.65%;哺乳類生理鹽水濃度為0.9%)中,加入詹鈉斯綠B酒精飽和液0.7~1毫升,中性紅酒精飽和液2毫升,混合。
詹鈉斯綠B稀釋液是活體染液。